Хроматиновый тест (определение хромосомального пола)

синдромом Клайнефельтера

Впервые Barr, Bertram, а затем Graham, Barr отметили, что клеточные ядра тканей различных органов животного и организма человека обнаруживают характерные отличительные половые признаки. В женском организме клеточные ядра содержат хроматиновые тельца («sex chromatin» — «половой хроматин»), которые представляют типичные для женского пола морфологические проявления ХХ-хромосом. Сначала исследования производили на биопсированных фрагментах кожи. У женщин минимум 50% всех клеточных ядер содержат характерные хроматиновые тельца. Однако оценка результатов исследования по бнопсированным фрагментам кожи оказалась весьма затруднительной и требовала много времени и значительного опыта. В дальнейшем выяснилось, что определение хромосомального пола можно производить путем исследования сегментированных лейкоцитов крови (Davidson, Smith, Sun, Rakoff, Kosenow, Scupin и др.). Хроматиновые тельца в виде плотного придатка, связанного с ядром тонкой нитью, можно обнаружить в среднем у 3% сегментированных лейкоцитов. Методика исследования весьма простая: окрашенный по Папенгейму мазок периферической кровипросматривают под микроскопом. 0днако большим недостатком этой методики является то, что для получения надежных результатов необходимо просмотреть не менее 500 нейтрофилов. Кроме того, сходные ядерные придатки, которые трудно отличить от типичного женского признака («sex chromatin»), наблюдаются нередко у мужчин.

Чтобы избежать этих недостатков, Moore, Barr, а также Marberger, Nelson, предложили определять хромосомальный пол путем соскоба слизистой оболочки рта. Lupatkin установили, что исследование 50 ядер - слизистой оболочки рта дает такие же надежные результаты как просмотр 500 сегментированных клеток крови.

Метод исследования не представляет больших затруднений.

Деревянным шпателем или краем предметного стекла делают соскоб со слизистой оболочки щеки. Полученный материал тотчас же наносят в виде мазка на предметное стекло, смазанное белковым глицерином. Мазок для фиксации опускают на 2 часа ил больше в раствор из равных частей 95% алкоголя и эфира. Затем его последовательно по 2 минуты опускают в 70 и 50% алкоголь и 2 раза по 2 минуты в дистиллированную воду. После этого мазок погружаюттога 5 минут в 1% раствор крезилэхтвиолета, промывают в течение 8 минут текучей водой, накрывают предметным стеклом и заделывают в желатину.         

Более простым является метод одномоментной фиксации и окраски соскобов, предложенный Thiries получивший название ацетоорсеинового. Он успехом был применен Sanderson и А. М. Пономаоенко: 1 г синтетического орсенина растворяют 45 мл ледяной уксусной кислоты. Раствор подогревают до кипения, охлаждают и фильтруют, к полученному раствору (основному) добавляют 55 частей дистиллированной воды и производят повторное фильтрование, после чего краска готова к употреблению.

Металлическим шпателем делают соскоб со слизистой оболочки рта.

Полученный материал переносят на предметное стекло и на него наносят одну каплю свежепрофильтрованного ацето-орсеина. Затем препара покрывают покровным стеклом (18X18 мм). После этого покровное стекло умеренно надавливают большим пальцем в течение 2—3 секунд через марлевый тампон или 3—4 слоя фильтровальной бумаги. Остатки краски вокруг покровного стекла (не допустить его сдвигания) тщательно удаляют.

При помощи иммерсионного объекта просматривают 50 хорошо окрашенных ядер, структура которых отчетливо различима, и отсчитывают количество ядер, у которых имеются хроматиновые тельца, расположенные у края ядра. Подобные же тельца, находящиеся внутри ядра, не следует принимать во внимание, так как при указанной выше окраске нельзя с уверенностью решить, являются ли они действительно половым хроматином. Следует указать, что довольно значительные различия в цифровых данных у разных авторов в основном зависят от того, принимались ли в расчет хроматиновые тельца, расположенные только у края ядра или также находящиеся внутри него. Количество хроматиновых телец, расположенных у края ядра, равно у женщин в среднем 26,8% (колебание от 16 до 64%), у мужчин — 0,15% (колебание от 0 до 4%)- Количество телец полового хроматина в ядре слизистой полости рта равно сумме всех хромосом без единицы. Так, например, у женщины с ХХХ-комплексом половых хромосом (трисомия) в ядре имеются два тельца полового хроматина, а у больных с синдромом Клайнефельтера с комплексом хромосом XXV обнаруживают одно тельце полового хроматина.

Методы исследования хроматина имеют, безусловно, большое практическое значение в различных отраслях медицины. Многочисленные исследования показали, что хроматиновый тест может играть значительную роль в суждении о прогнозе заболевания у бесплодного мужчины.

С диагностической целью он применяется у больных с синдромом Клайнефельтера, у которых существует положительный (женского типа) хроматиновый тест, в отличие от аналогичной этому синдрому клинической картины при других заболеваниях.